日本小葉常春藤為常春藤屬中耐寒性較強的品種,植株生長健壯,莖葉濃綠,節(jié)間短粗,組織充實,露地越冬性能良好,在筆者所在的揚州地區(qū)已經(jīng)受了-10℃至-15℃的低溫考驗。霜后莖葉略披紅暈,為不可多得的冬綠型垂直綠化材料,具有很好的推廣應(yīng)用前景。采用莖節(jié)、葉片為外植體,進行組織培養(yǎng)無性系快繁,可有效解決生產(chǎn)應(yīng)用過程中種源稀少、繁殖速率低的矛盾。
采用多年生日本小葉常春藤一年生莖枝的莖節(jié)和葉片為外植體。莖節(jié)外植體初代培養(yǎng),材料截成厚0.5厘米的小段,葉片外植體切為0.4×0.5厘米的方塊。培養(yǎng)溫度25℃,光照強度2000lx,光照時間每天12小時。
莖節(jié)外植體帶菌度較高,但組織發(fā)育充實,故以中等強度滅菌劑處理為好,即70%酒精0.5分鐘+0.1%升汞10分鐘,污染率為29.2%。若將0.1%升汞處理時間增加至15分鐘,雖污染率下降至12.5%,但殺傷率將上升,總體存活率反而會下降,故不宜采用。莖尖外植體因其組織幼嫩,試驗中雖使用最低強度5%的次氯酸鈉處理15分鐘,褐變死亡率仍高達72.9%;再降低滅菌強度,雖死亡率可以下降,但污染率又上升,在實際操作中較難掌握,故外植體的選用以莖節(jié)為宜。
初代培養(yǎng)效應(yīng)與取材時期密切相關(guān)。4月初正值露地栽培植株萌芽期,接種后外植體萌發(fā)率最高,達82.4%;5月上旬取用的為當(dāng)年萌生新梢,材料帶菌度低,故接種后污染率最低,為20.1%;7月底進入高溫多濕的梅雨季節(jié),外植體帶菌度急劇上升,滅菌困難,材料污染率上升,高達89.4%。故日本小葉常春藤的莖節(jié)組織培養(yǎng),外植體取用時間以4月初到5月上旬為宜。
組織培養(yǎng)中,生長素和細胞激動素的添加,均以低濃度為宜。初代培養(yǎng)基以6-BA1.0毫克/升-1+2.4-D0.1毫克/升-1為好,誘芽率可達90.5%,顯著高于其他處理。誘芽生長量達1.2厘米,呈極顯著變異水平。繼代增殖培養(yǎng),在6-BA1毫克/升-1水平,生長素配比量仍以低水平為宜,生長素類別以NAA優(yōu)于2.4-D,試驗范圍內(nèi)以MS+6-BA1.0毫克/升-1+NAA0.01毫克/升-1的增殖系數(shù)為高。
葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng),接種3天葉片卷曲增厚。這不僅和6-BA/NAA相對比值有關(guān)(1∶3>1∶2>1∶1),且和其絕對用量水平緊密相關(guān),綜合試驗結(jié)果以MS+6-BA1.0毫克/升-1+NAA3.0毫克/升-1時最高,達82.4%。
莖節(jié)培養(yǎng)過程中,經(jīng)多次繼代繁殖,發(fā)現(xiàn)有皺葉性狀變異的個體出現(xiàn)。同樣的性狀變異,在其他常春藤物種中有選育成新品種的應(yīng)用范例,若能將變異性狀加以分離、固定,并擴大繁殖,在提高其觀賞特性上具良好的應(yīng)用前景,不失為一條途徑。若能將組織培養(yǎng)技術(shù)和輻照誘變等育種手段相結(jié)合,則對常春藤育種研究有很大幫助。